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多聚半乳糖醛酸酶(PG)能降解果胶使细胞壁破损.成熟的番茄果实中,PG合成显著增加,能使果实变红变软,但不利于保鲜.利用基因工程减少PG基因的表达,可延长果实保质期.科学家将P
更新时间:2024-04-27 23:51:34
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问题描述:

多聚半乳糖醛酸酶(PG)能降解果胶使细胞壁破损.成熟的番茄果实中,PG合成显著增加,能使果实变红变软,但不利于保鲜.利用基因工程减少PG基因的表达,可延长果实保质期.科学家将PG基因反向接到Ti质粒上,导入番茄细胞中,得到转基因番茄,具体操作流程如图.据图回答下列问题:

(1)若已获取PG的mRNA,可通过___方法获取PG基因.PCR技术扩增目的基因的前提是___,以便根据这一序列合成引物.

(2)该质粒含14000碱基对(14kb),若同时使用两种限制酶切割,产生的片段有5kb、7.5kb、1.5kb,则只用限制酶BamHⅠ切割时产生的片段长度分别是___和___.

(3)用含目的基因的农杆菌感染番茄原生质体后,可用含有___的培养基进行筛选.如果想通过实验鉴别细胞壁是否再生,可将其置于质量分数为30%的蔗糖溶液中,观察细胞___现象进行判断.

(4)由于导入的目的基因能转录出反义RNA,且能与___互补结合,因此可抑制PG基因的正常表达,使番茄果实的保质期延长.

白玉洁回答:
  (1)若已获取PG的mRNA,可通过逆转录法获取PG基因.PCR技术扩增目的基因的前提是有一段已知目的基因的核苷酸序列,以便根据这一序列合成引物.   (2)该质粒含14000碱基对(14kb),若同时使用两种限制酶切割,产生的片段有5kb、7.5kb、1.5kb,则只用限制酶BamHⅠ切割时产生的片段长度分别是7.5kb和5+1.5=6.5kb.   (3)由图可知,重组质粒中含卡那霉素抗性基因而四环素抗性基因被破坏,因此用含目的基因的农杆菌感染番茄原生质体后,可用含有卡那霉素的培养基进行筛选.之后,还需将其置于质量分数为0.3g/ml的蔗糖溶液中,观察细胞细胞是否发生质壁分离现象来鉴别细胞壁是否再生.   (4)由于导入的目的基因能转录出反义RNA,且能与天然的PG基因转录的mRNA互补结合,因此可抑制PG基因的正常表达.   故答案为:   (1)逆转录法 有一段已知目的基因的核苷酸序列   (2)7.5kb 6.5kb   (3)卡那霉素 是否发生质壁分离   (4)天然的PG基因转录的mRNA(正常的mRNA)
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